8ª PRÁCTICA
10/02/2020
PRÁCTICA Nº8: "DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FIBRINÓGENO"
MÉTODO DE CLAUSS
FUNDAMENTO
El Fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en Fibrina.
El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma.
La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
SIGNIFICADO CLÍNICO
El Fibrinógeno (Factor I), proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coágulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismos de coagulación.
La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario, se observan valores bajos en terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas, disfibrinogenia congénita, DIC (Coagulación intravascular diseminada) y pancreatitis.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
MATERIAL NECESARIO
El reactivo 1, hay que reconstituirlo con 2 mL de agua destilada. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Mantendrá una estabilidad de 7 días a 2-8ºC o 1 mes a -20ºC, si se congela inmediatamente y se conserva en el frasco original. No congelar otra vez.
MUESTRA
Realizada a través del programa "Excel". Es una curva de calibración en función de las concentraciones de los distintos tubos y tiempos de formación del coágulo. Los resultados fueron los siguientes:
PRÁCTICA Nº8: "DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE FIBRINÓGENO"
MÉTODO DE CLAUSS
FUNDAMENTO
El Fibrinógeno, en presencia de un exceso de trombina, se transforma en Fibrina.
El tiempo de formación del coágulo es inversamente proporcional a la concentración de Fibrinógeno presente en la muestra de plasma.
La determinación de fibrinógeno por el tiempo de coagulación de trombina, está basada en el método descrito por Clauss. En presencia de altas concentraciones de trombina, el tiempo necesario para la formación del coágulo en el plasma diluido es inversamente proporcional a la concentración de fibrinógeno.
SIGNIFICADO CLÍNICO
El Fibrinógeno (Factor I), proteína sintetizada en el hígado, es un componente de la sangre utilizado para formar el coágulo. Su determinación nos ayuda a evaluar las alteraciones en los mecanismos de coagulación.
La concentración de fibrinógeno se incrementa en inflamaciones agudas y embarazo; por el contrario, se observan valores bajos en terapias trombolíticas, enfermedades hepáticas, disfibrinogenia congénita, DIC (Coagulación intravascular diseminada) y pancreatitis.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
MATERIAL NECESARIO
- Pipetas automáticas de 20-200 microlitros y de 100-1000 microlitros.
- Puntas de pipeta amarillas y azules.
- Gradilla.
- 5 Tubos de ensayo.
- Cubetas del coagulómetro.
- Bote de orina ("contenedor de desechos"), donde tiraremos las puntas de pipeta cada vez que las cambiemos durante la práctica.
- R1: Trombina bovina.
- R2: Tampón Imidazol, Azida sódica.
- R3: Solución Caolín.
- Opcional: Coagulation CAL, Control Normal y Control Pathologic.
- Coagulómetro.
El reactivo 1, hay que reconstituirlo con 2 mL de agua destilada. Tapar y mezclar suavemente hasta disolver su contenido. Mantendrá una estabilidad de 7 días a 2-8ºC o 1 mes a -20ºC, si se congela inmediatamente y se conserva en el frasco original. No congelar otra vez.
MUESTRA
- Plasma obtenido por punción venosa.
- Depositar en 2 tubos de ensayo 450 microlitros del reactivo 2 (Tampón Imidazol).
- Echar 50 microlitros de la muestra normal (Tubo eppendorf marcado con una "V") a uno de los dos tubos.
- Posteriormente, depositar 50 microlitros del "Control Normal" en el otro tubo de ensayo que contiene el reactivo 2.
- Homogeneizar ambos tubos con puntas de pipeta diferentes.
Nota: Ambos tubos tienen una dilución de 1/10. - Coger 200 microlitros de cada uno de los 2 tubos de ensayo y transferirlos a otros 2 tubos de ensayo distintos; de manera que dispondremos de 1 tubo de ensayo con 200 microlitros de R2 + Muestra Normal y 1 tubo de ensayo con 200 microlitros de R2 + Control Normal.
- Depositar 200 microlitros del Control Patológico en otro tubo de ensayo a parte, de manera que ahora dispondremos de 3 tubos de ensayo.
- A continuación, depositar 20 microlitros del reactivo 3 en cada uno de los 3 tubos de ensayo.
- Atemperar a 37ºC durante 4-6 minutos.
- Colocar en primer lugar en la cubeta del coagulómetro el Control Patológico. Situar la cubeta en el medidor del coagulómetro, taparla con el "tapón" e introducir 100 microlitros de Trombina a través del agujero de la superficie del tapón. Poner en marcha el cronómetro del coagulómetro para medir el tiempo de formación del coágulo.
- Repetir el mismo procedimiento con el Control Normal para conocer el tiempo que tarda en formarse el coágulo.
- Repetir el mismo procedimiento con la Muestra.
- Anotar los resultados.
- Realizar una curva de calibración con los datos proporcionados.
Nota: Hemos realizado una para toda la clase.
- Control Patológico: 50'3 segundos.
- Control Normal: 24 segundos.
- Muestra: 23'2 segundos.
- Control Patológico: 196 (167 - 225) mg/dL.
- Control Normal: 208 (177 - 239) mg/dL.
- Muestra: 200 - 400 mg/dL.
Realizada a través del programa "Excel". Es una curva de calibración en función de las concentraciones de los distintos tubos y tiempos de formación del coágulo. Los resultados fueron los siguientes:
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