11ª PRÁCTICA
17/02/2020
PRÁCTICA Nº 11: "DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA"
OBJETIVO
La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianhemoglobina.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias.
Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
[(A) Muestra / (A) Patrón] x 15 (Concentración del Patrón) = g/dL de hemoglobina en la muestra.
RESULTADOS
- Absorbancia de la Muestra: 0'381 A.
- Absorbancia del Patrón: 0'421 A.
(0'381 A / 0'421 A) x 15 = 13'6 g/dL de hemoglobina.
El resultado ha sido correcto, ya que se encuentra dentro del rango de los valores normales (12-16 g/dL).
VALORES DE REFERENCIA
PRÁCTICA Nº 11: "DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DE HEMOGLOBINA"
OBJETIVO
- Determinar la concentración de hemoglobina presente en una muestra de sangre capilar mediante el método de Drabkin. Colorimétrico y por espectrofotometría.
La hemoglobina es oxidada por la acción del ferricianuro a metahemoglobina y mediante el cianuro se convierte en cianhemoglobina.
La intensidad del color formado es proporcional a la concentración de hemoglobina presente en la muestra ensayada.
SIGNIFICADO CLÍNICO
La hemoglobina es una proteína que contiene hierro, otorga el color rojo a la sangre. Se encuentra en los glóbulos rojos y es la encargada del transporte de oxigeno por la sangre desde los pulmones a los tejidos. Cuando el nivel de hemoglobina aparece por debajo de los niveles normales indica anemia que puede obedecer a diferentes causas: anemia primaria, cáncer, embarazo, enfermedades renales o hemorragias.
Si el nivel de hemoglobina es alto puede deberse a cardiopatías, deshidratación o estancia en lugares de gran altitud.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.
REACTIVOS
- HEMOGLOBIN 50X: Ferricianuro de potasio, Cianuro de potasio y Dihidrógeno fosfato de potasio.
- HEMOGLOBIN CAL: Patrón de Hemoglobina 15 g/dL. Origen animal.
- 2 lancetas.
- Alcohol 70º.
- Vaso de precipitados de 100 mL.
- Agua destilada.
- Puntas de pipeta azules y amarillas.
- Pipetas automáticas de 20-200 microlitros y de 1000-5000 microlitros.
- Gradilla.
- 3 tubos de ensayo de 10 mL.
- Cubetas de espectrofotometría.
- Papel para limpiar las paredes de las cubetas antes de proceder a la medición.
- Espectrofotómetro.
- En primer lugar, debemos preparar en una gradilla 3 tubos de ensayo de 10 mL cada uno.
- Rotular los tres tubos como "B" (Blanco), "P" (Patrón) y "M" (Muestra).
- Depositar 4'9 mL de agua destilada en cada uno de los 3 tubos de ensayo.
- Posteriormente, echar 2 gotas de HEMOGLOBIN 50x en cada uno de los 3 tubos.
Nota: De esta manera, ya habremos depositado el Reactivo de Trabajo en los 3 tubos.
- Depositar 20 microlitros de HEMOGLOBIN CAL en el tubo marcado como "P" (Patrón) y resuspender.
- Echar 20 microlitros de sangre capilar en el tubo marcado como "M" (Muestra) y resuspender.
- Incubar 3 minutos a temperatura ambiente (15-25ºC).
- Medir en el espectrofotómetro a 546 nm las absorbancias del blanco para ajustar a 0 frenta a agua destilada, el Patrón y la Muestra.
- Realizar los cálculos necesarios.
[(A) Muestra / (A) Patrón] x 15 (Concentración del Patrón) = g/dL de hemoglobina en la muestra.
RESULTADOS
- Absorbancia de la Muestra: 0'381 A.
- Absorbancia del Patrón: 0'421 A.
(0'381 A / 0'421 A) x 15 = 13'6 g/dL de hemoglobina.
El resultado ha sido correcto, ya que se encuentra dentro del rango de los valores normales (12-16 g/dL).
VALORES DE REFERENCIA
- Hombres: 14-18 g/dL.
- Mujeres: 12-16 g/dL.
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