7ª PRÁCTICA

31/01/2020
PRÁCTICA Nº7: "DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA (PT)"

OBJETIVO

• Tromboplastina cálcica de alta sensibilidad para la determinación del tiempo de Protrombina, para la evaluación de la vía extrínseca de la coagulación y para el control de la Terapia Anticoagulante Oral en plasma humano citratado.

FUNDAMENTO
Basado en el test del tiempo de Quick, el ensayo mide el tiempo transcurrido hasta la formación del coágulo después de la mezcla del plasma con Tromboplastina (un extracto de tejido rico en Factor Tisular, fosfolípidos y calcio). La coagulación se inicia por activación del FVII con el Factor Tisular.

REACTIVOS

• PT: Tromboplastina de cerebro de conejo, cloruro cálcico, inhibidor de heparina, tampón y conservantes. Liofilizado.

MATERIAL NECESARIO

• Pipeta automática de 1000-5000 microlitros y puntas de 5 microlitros.
• Agua destilada.
• Pipeta automática de 100-1000 microlitros y puntas azules de pipeta.
• Cubetas para el coagulómetro desechables.
  

APARATOS

• Coagulómetro.
• Cronómetro.
• Baño termostático o baño María.

PREPARACIÓN
Reconstituir el contenido del vial de PT con 4 mL de agua destilada con ayuda de una pipeta automática de 1000-5000 microlitros y punta de 5000 microlitros. Tapar el vial y mezclar suavemente hasta disolver su contenido completamente. Debemos evitar la formación de espuma.

MUESTRA

• Plasma congelado que se encontraba almacenado en el congelador del laboratorio. Por ello, debemos atemperarlo en el baño María antes de su uso.
  

PROCEDIMIENTO

1. Encender el coagulómetro y colocar en la placa calefactora el bote del reactivo y las muestras para terminar de atemperarlas. Debe tomar la temperatura de 37ºC.
2. Añadir 100 microlitros del plasma en una cubeta desechable del coagulómetro.
   
3. Posteriormente, introducir la cubeta en el pocillo situado a la derecha del coagulómetro y tapar con el tapón protector. Añadir 200 microlitros del reactivo de Tromboplastina. 
   
   
   
4. Poner en marcha el cronómetro del coagulómetro y anotar el tiempo que tarda en formarse el coágulo.

CÁLCULOS
Los valores se pueden expresar en segundos, en tasa de PT (PR comparando con un valor de referencia), porcentaje de actividad (%, con curva de calibración utilizando un plasma de referencia), o en tasa internacional normalizada (INR):
INR = [PT (seg) / PT referencia (seg)] ISI
El ISI (Índice de sensibilidad Internacional) depende del lote de reactivo y del sistema analítico utilizado.

RESULTADOS
- Tiempo de Protrombina del plasma del paciente: 11'9 segundos.

- Tiempo de Protrombina de referencia: 10'8 segundos.
- ISI: 1'26.
INR = (11'9 / 10'8) elevado a 1'26 = 1'13.

VALORES DE REFERENCIA

• Tiempo de Protombina: 14'0 (11'9 - 16'1) segundos.
• INR: 0'9 - 1'15.

OBSERVACIONES y CONCLUSIONES

• La prueba PT forma parte del estudio analítico prequirúrgico rutinario para detectar posibles problemas de tipo hemorrágico.
• Constituye la prueba más comúnmente utilizada en el laboratorio para el control de una terapéutica anticoagulante en pacientes que reciben cumarínicos.
• El objetivo del tratamiento anticoagulante es evitar una trombosis sin inducir una tendencia peligrosamente hemorrágica.