5ª PRÁCTICA

17/01/2020
PRÁCTICA Nº5: "DETERMINACIÓN CUANTITATIVA DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (APTT)"

OBJETIVO

• Determinar la tasa de APTT de una muestra problema de plasma mediante espectrofotometría.

FUNDAMENTO
Los factores intrínsecos de la coagulación se activan en presencia de un complejo fosfolipídico y un activador soluble en plasma citratado; se mide el tiempo transcurrido después de la adición del cloruro cálcico (CaCl2) hasta la formación del coágulo de fibrina.

SIGNIFICADO CLÍNICO
La medida del tiempo de APTT, es la determinación más común junto con la PT, sirve para determinar trastornos de la coagulación y es particularmente sensible a los defectos de la coagulación intrínseca (Factores VIII, IX, XI, XII).
Se usa normalmente para la monitorización de las terapias anticoagulantes con heparina.
El diagnóstico clínico debe realizarse teniendo en cuenta todos los datos clínicos y de laboratorio.

MATERIAL NECESARIO

• Pipeta automática de 10-100 microlitros.
• Puntas de pipeta amarillas.
• Cubetas para el coagulómetro de plástico de un solo uso (desechables).
• Gradilla.
• Bote de orina ("contenedor de desechos").
• Cronómetro.
  

REACTIVOS

• R1 Activador: Ácido elágico, Tampón y conservantes.
• R2 Iniciador: Cloruro cálcico (CaCl2).
• Opcional: CONTROL NORMAL, CONTROL PATOLÓGICO.
  

APARATAJE

• Coagulómetro.

MUESTRA

• Plasma citratado refrigerado.

PROCEDIMIENTO

1. En primer lugar, encender el coagulómetro y poner los reactivos y el plasma en la placa calefactora para atemperarlos.
2. Homogeneizar los reactivos suavemente por inversión.
3. Pipetear en una cubeta para el coagulómetro 100 microlitros de plasma citratado y otros 100 microlitros del reactivo 1 con ayuda de una pipeta automática de 10-100 microlitros y puntas amarillas.
4. Homogeneizar la disolución por pipeteo e incubar 5 minutos a 37ºC en el coagulómetro (TIEMPO DE ACTIVACIÓN).
   
   
   
5. Introducir en la cubeta uno de los imanes de los que dispone el coagulómetro.
   
   
   
6. Una vez transcurridos los 5 minutos, introducir la cubeta en la "cámara" de la que dispone el aparato, cerrar la tapa e introducir por el agujero que dispone en la superficie 100 microlitros del reactivo 2.
   
7. Poner en marcha el cronómetro del coagulómetro y medir el tiempo de formación del coágulo.
8. Posteriormente, repetir el procedimiento con el control. 
   

CÁLCULOS
Los valores se pueden expresar en segundos o en tasa de APTT, dividiendo el resultado de la muestra (segundos) por el tiempo de reacción del plasma Control (segundos).
Tasa de APTT = APTT del paciente en segundos / APTT de plasma normal (pool %) en segundos.

RESULTADO
- APTT del paciente: 13'6 segundos.
- APTT del plasma control: 6 segundos.
Tasa de APTT = 13'6 segundos / 6 segundos = 2'26 segundos.
El resultado ha sido el correcto, ya que la tasa de APTT se encuentra entre los valores de 1,5- 2,5 segundos.

OBSERVACIONES

• En el curso de la vigilancia de un tratamiento con heparina,las condiciones de realización de la prueba son particularmente importantes. La centrifugación y la prueba han de hacerse en la hora que sigue a la toma de la muestra.
• Cuando se utilice tromboplastina parcial, para activarla hay que mezclarla a partes iguales con una suspensión de caolín (caolín 2 g y ClNa 0'85% hasta 100 mL). En el APTT el caolín activa los factores de contacto (factores XI y XII), facilitando los resultados más reproductibles.
• No usar como anticoagulante oxalato sódico, EDTA o heparina.
• Anticonceptivos orales, estrógenos o embarazo pueden influir en los resultados.