3ª PRÁCTICA

02/12/2019
PRÁCTICA Nº 3: "DETERMINACIÓN DE COOMBS DIRECTO EN TUBO"

OBJETIVO

• Determinar si existen o no anticuerpos irregulares o incompletos fijados en la membrana de los hematíes del paciente enfrentando éstos al reactivo de Coombs específico para ello.

FUNDAMENTO

• Permite la detección e identificación de globulinas ligadas inmunológicamente a los hematíes.
• La adición del reactivo antiglobulina a los mismos ocasionará su aglutinación.

APLICACIONES

• Enfermedad hemolítica del recién nacido.
• Anemia hemolítica autoinmune.
• Reacción hemolítica post-transfusional.

MATERIAL NECESARIO

• Gradilla.
• 2 tubos de 3 mL.
• Pipetas de 100-1000 microlitros y otra de 50 microlitros.
• Puntas amarillas y azules.
• Rotulador permanente.

REACTIVOS

• AGH y Solución Salina Fisiológica (SSF).
• Hematíes control sensibilizados con IgG (hematíes reactivos que han sido sensibilizados industrialmente).
  
  

APARATAJE

• Centrífuga.

MUESTRA

• Sangre anticoagulada con EDTA.

PROCEDIMIENTO

1. Realizamos el lavado de hematíes y una dilución al 5%. Para ello, depositar 0'5 mL (=500 microlitros) de sangre anticoagulada con EDTA en un tubo de ensayo de 3 mL y llenarlo hasta completarlo con SSF. Tapar con tapón y centrifugar a 1000 rpm.
   
2. Repetir el proceso 3 veces, hasta que el sobrenadante tenga un aspecto transparente.
3. Depositar 4 gotas de antiglobulina humana en otro tubo de ensayo de 3 mL. 
   
4. Echar 50 microlitros del tubo de dilución de los hematíes al de la antiglobulina humana. Agitar suavemente.
5. Centrifugar a 2.500 rpm durante 1 minuto.
6. Resuspender el sedimento de hematíes dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo.
7. Observar la presencia o ausencia de aglutinación.

RESULTADOS
Lectura de resultados:
- Observación macroscópica de la aglutinación:

• Presencia de aglutinación (+): aparecen grumos rojos oscuros que flotan en el líquido.
• Ausencia de aglutinación (-): los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.
• En nuestro caso, el resultado ha sido positivo.
  
  
  
  

OBSERVACIONES

• Es preferible que la muestra esté anticoagulada con EDTA, porque así se evita la sensibilización de los hematíes in vitro por la activación del complemento.

CONCLUSIÓN

• La prevalencia elevada (3.6%) de la prueba directa de Coombs positiva en la detección neonatal rutinaria, apoya la indicación de incorporar dicha prueba al tamiz neonatal, independientemente del grupo ABO y Rh materno. Queda por obtener su beneficio en la detección temprana de la ictericia neonatal.