2ª PRÁCTICA

02/12/2019
PRÁCTICA Nº2: "CONFIRMACIÓN DEL GRUPO SANGUÍNEO A, B y D, COMBINADO CON LA DETERMINACIÓN DE ANTICUERPOS IRREGULARES"

OBJETIVO
Estas pruebas están indicadas en donantes con historia de transfusión previa o embarazo. Es de gran importancia en el diagnóstico y tratamiento en la enfermedad hemolítica del recién nacido y de ciertos trastornos hemáticos, así como en estudios durante el embarazo.

FUNDAMENTO
Los anticuerpos irregulares son aquellos que se producen frente a antígenos distintos a los del sistema ABO. Aparecen por inmunización, transfusional o fetomaterna, y pueden producir reacciones postransfusionales.
La detección se realiza enfrentando el plasma a unas serie de hematíes tipados, de los cuales se conocen con exactitud los antígenos presentes en su membrana, y aplicando técnicas de aglutinación salina y test de Coombs indirecto.
De este modo, se detectan anticuerpos completos Ig M e incompletos Ig G.

REACTIVOS

•  Los microtubos de la tarjeta ID-Card contienen:
• 1 microtubo anti-A monoclonal.
• 1 microtubo con anti-B monoclonal.
• 1 microtubo con anti-D monoclonal.
• 3 microtubos con antiglobulina humana poliespecífica (anti-IgG de conejo).

•  DiaCell I-II-III para el escrutinio de anticuerpos.

MATERIAL NECESARIO

• Pipeta automática de 50 microlitros y otra de 100-1000 microlitros.
• Gradilla.
• Tubo de ensayo de 3 mL.
• Puntas azules y amarillas.
• Solución Salina Fisiológica (SSF).
• Portatarjetas.
  

APARATAJE

• Centrífuga.

MUESTRA

• Sangre anticoagulada con EDTA.

PROCEDIMIENTO

1. Recortar la parte superior de un bote de SSF con unas tijeras. Posteriormente, coger 500 microlitros de SSF (con la pipeta de 100-1000 microlitros y puntas azules) y depositarlos en el tubo de ensayo de 3 mL.
   
2. A continuación, depositar 50 microlitros de la sangre anticoagulada con EDTA en el tubo de ensayo de 3 mL, junto con la Solución Salina Fisiológica.
   
3. Pipetear 10 microlitros de la suspensión de hematíes en los primeros 3 microtubos (anti-A, anti-B, anti-D) de la tarjeta-ID. 
   Nota: Retirar la lámina de sellado sólo de los microtubos que se vayan a utilizar manteniendo la tarjeta en posición vertical.
   
4. Pipetear 50 microlitros de cada reactivo "DiaCell I-II-III" en los microtubos 4,5 y 6.
   
   
   
   
5. Agregar 25 microlitros de suero en los microtubos 4,5 y 6. 
   
6. Cubrir los microtubos de la placa con la lámina de sellado y papel de Parafilm. Incubar la tarjeta durante 15 minutos a 37ºC.
   
7. Centrifugar la tarjeta durante 10 minutos en la centrífuga para éstas.
8. Interpretar los resultados.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS
- Positivo: Los hematíes aglutinados forman una línea roja sobre la superficie del gel o están repartidos en el gel.
- Negativo: Sedimento compacto de hematíes en el fondo del tubo.

RESULTADOS
- Grupo sanguíneo: 0.
- Rh: Positivo.
- Anti-IgG + C3d: 2 primeros microtubos positivos y el tercero (último de la tarjeta) negativo.

OBSERVACIONES

• La confirmación ABD no reemplaza la determinación ABO/Rh completa. Ella debe considerarse solamente como confirmación de un grupo sanguíneo determinado anteriormente, donde la tipificación ABO ha sido confirmada según las reglas rutinarias pro medio de una muestra de suero y la tipificación ABO/Rh ha sido validada por un test de control negativo.
• Los anti-B de origen monoclonal no reaccionan con los antígenos B adquiridos.
• Las tarjetas que muestren burbujas de aire o gotas de gel en la parte superior de los microtubos y/o de la lámina de sellado, deben ser centrifugadas antes de usarlas.
• Es sabido que determinados medicamentos pueden producir reacciones positivas en los procedimientos de antiglobulina humana.

CONCLUSIONES

• Una reacción negativa indica la ausencia de anticuerpo irregulares detectables en el suero o plasma del paciente.
• Una reacción positiva indica la presencia de anticuerpos irregulares.