14ª PRÁCTICA

24/02/2020
PRÁCTICA Nº14: "REACTIVO SATURANTE-PRECIPITANTE DE CAPACIDAD DE FIJACIÓN TOTAL DE HIERRO (CFTH)".

OBJETIVO

• Determinar la concentración de CFTH presente en el plasma de un paciente mediante el método de Saturación-Precipitación y espectrofotometría.

FUNDAMENTO
La transferrina sérica se satura con un exceso de Fe3+ y el exceso no fijado se elimina por precipitación con carbonato magnésico, determinándose a continuación la cantidad total de hierro presente. La diferencia entre la capacidad de fijación total de hierro hallada (CFTH) y el hierro sérico inicial (Hb) nos da la capacidad de fijación del hierro no saturado o residual.

SIGNIFICADO CLÍNICO
El hierro es el constituyente de un gran número de enzimas. La mioglobina, proteína muscular, contiene hierro, así como el hígado.
El hierro es necesario para la producción de hemoglobina, molécula que transporta el oxígeno en el interior de los glóbulos rojos.
El hierro se controla, normalmente, junto con la capacidad de fijación total del hierro (CFTH), y nos indica la capacidad de unión sérica disponible.
Encontramos niveles altos de CFTH en la anemia ferropénica.
Niveles bajos en hemocromatosis, cirrosis, hepatitis aguda.

MATERIAL NECESARIO

• Pipeta automática de 100-1000 microlitros.
• Gradilla.
• Puntas de pipeta azules y amarillas.
• Cubetas de espectrofotometría.
• Tubos de ensayo y tapones.
• Pipetas Pasteur.
• Papel para limpiar las paredes de las cubetas antes de proceder a su medición en el espectrofotómetro.
  

APARATOS

• Centrífuga.
• Espectrofotómetro a 562 nm.

REACTIVOS

• R5 Solución Saturante: Solución de hierro.
• R6 Agente Precipitante: Carbonato de magnesio.
  

MUESTRA

• Plasma heparinizado libre de hemólisis.

PROCEDIMIENTO

1. Depositar en un tubo de ensayo 500 microlitros del plasma + 1000 microlitros del reactivo 5.
   
2. Mezclar e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.
3. Echar 3 cucharadas del reactivo 6 en el tubo de ensayo.
   
   
   
4. Mezclar bien e incubar 10 minutos a temperatura ambiente.
5. Centrifugar durante 15 minutos a 3000 r.p.m.
6. Recoger el sobrenadante cuidadosamente con una pipeta Pasteur y procesar como una muestra para la determinación de hierro.
   
   
   
7. Repetir la práctica del hierro del otro día usando como muestra el sobrenadante recogido de esta práctica.

RESULTADO
- Absorbancia de la Muestra: 0'109 A.

- Absorbancia del Patrón: 0'057 A.

(0'109 A / 0'057 A) x 100 = 191'23 microgramos/dL.

VALORES DE REFERENCIA

• 200-400 microgramos/dL.

OBSERVACIONES

• El sobrenadante es estable como mínimo 1 hora a temperatura ambiente. Si aparece turbidez, centrifugarlo de nuevo.

CONCLUSIÓN

• El resultado obtenido se encuentra un poco por debajo del rango de los valores normales, por lo que nos hemos debido de equivocar en algún procedimiento de la práctica ya sea por los tiempo o por no pipetear bien o el paciente presenta riesgo leve de hemocromatosis, cirrosis o hepatitis aguda.