1ª PRÁCTICA

29/11/2019
PRÁCTICA Nº1: "DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Y GENOTIPO MÁS PROBABLE DEL GRUPO Rh"

OBJETIVO

• Investigar el genotipo más probable del sistema Rh enfrentando los hematíes problema a distintos sueros que contienen anticuerpos dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh.

FUNDAMENTO
El genotipo de una persona es su dotación genética en el cromosoma, y el fenotipo es la manifestación de ese genotipo.
El fenotipo puede ser idéntico al genotipo.
Dado que no existe el antígeno d, ni el anticuerpo anti-d, es imposible determinar si el antígeno D es homozigoto o heterozigoto mediante su detección en los hematíes.
Determinamos el genotipo más probable.
El interés en la determinación del genotipo se debe a que existen casos de madres inmunizadas frente a D, y conviene conocer si el padre es o no homocigoto para D, antes de producirse un nuevo embarazo. Un padre homocigoto D, transmitirá el gen D a todos sus hijos, mientras que uno heterocigoto lo transmitirá con un 50% de probabilidades.
El fenotipo se determina enfrentando los hematíes problema con los antisueros anti-D, anti-C, anti-E, anti-c y anti-e.
El genotipo más probable dependerá de la raza o el grupo étnico.
En el genotipo del sistema Rh, se enfrentan los hematíes problema a distintos sueros dirigidos contra los antígenos que componen el sistema Rh. La existencia o no de estos antígenos en la superficie de los hematíes, se detecta por una reacción de aglutinación.

MATERIAL NECESARIO

• Tubos de centrífuga.
• Pipetas Pasteur.
• Papel Parafilm.
• Gradilla.
• Tubos de ensayo de 3 mL. 

REACTIVOS

• Anti-D (D).
• Anti-E (E).
• Anti-C (C).
• Anti-e (e).
• Anti-c (c).
• Autocontrol D (CD).
• Suero Fisiológico.
  

APARATAJE

• Centrífuga.

PROCEDIMIENTO
La muestra será una suspensión de hematíes problema lavados al 5% en Solución Salina Fisiológica. Hay dos muestras problemas: A y B.

1. En primer lugar, procederemos a la realización del lavado de los hematíes de la muestra-problema y una dilución al 5% en Suero Fisiológico. Para ello, lavamos tres veces los hematíes con solución salina fisiológica.
2. Tomamos 0'5 mL de la sangre problema A y B (anticoagulada con EDTA), y la depositamos en un tubo de ensayo de 3 mL (cada una en un tubo diferente). Posteriormente, completamos casi el tubo de ensayo con SSF y agitamos suavemente.
   
   
   
   
3. Centrifugar a 4 minutos a 2.000 rpm.
4. Retiramos el sobrenadante y repetimos dos veces más el proceso.
5. Rotular 6 tubos de ensayo de 3 mL como "D,C,E,c,e y CD" de la dilución A y otros 6 tubos de la dilución B.
   
6. Depositar 3 gotas del antisuero correspondiente a cada tubo y 2 o 3 gotas de la suspensión de hematíes problema lavados al 5%, es decir, depositar2 o 3 gotas de la solución de hematíes correspondientes a la muestra problema A en 6 tubos y de la muestra problema B en otros 6. Posteriormente, añadir 3 gotas de cada reactivo en los tubos indicados con su inicial (de cada uno de los reactivos, depositar en un tubo de la muestra A y otro de la B). 
   
   
   
   
7. Tapar los tubos y agitar suavemente.
8. Centrifugar a 1000 rpm durante 1 minuto.
   
   
   
   
9. Resuspender el sedimento de hematíes dando pequeños golpecitos en el fondo del tubo.
10. Observar la presencia o ausencia macroscópicamente de aglutinación.

RESULTADOS

• Presencia de aglutinación (+): aparecen grumos rojos oscuros que flotan en el líquido.
• Ausencia de aglutinación (-): los hematíes permanecen en forma de suspensión homogénea de color rojizo.

- Tubos muestra problema A: sólo ha aglutinado el 5c.

- Tubos muestra problema B: han aglutinado todos menos el CD.

 

OBSERVACIONES

• Para validar la prueba, el autocontrol Rh debe dar aglutinación negativa.

CONCLUSIONES

• Respetar los tiempos que se requieren en cada paso con ayuda de un cronómetro.
• Saber interpretar los resultados según en qué tubo se haya producido la aglutinación para evitar resultados erróneos.